ПЦР-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованию

ПЦР анализ, что это такое знают не многие, хотя сегодня это один из инновационных методов диагностики инфекционных заболеваний, за который его разработчик 1993 году получил Нобелевскую премию. Этот высокотехнологический метод позволяет обнаружить серьезные заболевания на начальной стадии и своевременно начать их лечение.ПЦР-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованию

Суть методики и сфера применения

Анализ основан на принципах молекулярной биологии. Исследование методом ПЦР заключается в использовании особого фермента, что под воздействием температурных режимов, копирует РНК и ДНК присутствующих в собранном биоматериале бактерий и вирусов.

Такое массовое размножение дает возможность врачу в точности определить, к какому виду принадлежит бактерия, спровоцировавшая недуг, а также измерить уровень ее концентрации в биоматериале.

Проводится процедура копирования в специальном аппарате – амплификаторе, который нагревает и охлаждает пробирки с собранным материалом, создавая удобное условия для репликации.

ПЦР исследование проводят по многим причинам, но чаще всего его используют для определения наличия таких инфекционных болезней как:

  • ВИЧ;
  • герпес;
  • половых инфекции — хламидиоз, уреаплазмоз, гарднереллез, трихомониаз;
  • кандидоз;
  • гепатит;
  • мононуклеоз;
  • листериоз;
  • цитомегаловирус;
  • туберкулез;
  • вируса папилломы человека;
  • клещевой энцефалит.

ПЦР анализ не ограничивается сферой применения в медицине, не редко скрининг делают, если необходимо понять, кому принадлежит биологический материал, найденный на месте преступления, то есть ПЦР анализ массово применяют в криминалистике. Требуется отметить, что мазок или кровь на ПЦР берут, если требуется установить отцовство. Результаты ПЦР диагностики ничем не уступают привычному анализу на ДНК родство, да и стоит намного дешевле.

Особенности диагностики

Анализ методом ПЦР обладает огромным количеством положительных сторон. В первую очередь, важно отметить чувствительность теста.

ПЦР анализатор способен определить молекулы ДНК бактерий даже при их малом количестве, то есть врач получает информацию о ранней стадии заболевания или начале хронической формы недуга.

Анализ крови ПЦР способен даже определить наличие инфекционного заболевания, что находится в латентной форме и ничем себя не выдает.

Требуется отметить, что анализ ПЦР у мужчин и у женщин может быть проведен при наличии любого типа материала, это не обязательно должна быть кровь или мазок, подойдет слюна, клетки кожи и даже моча.

Результаты анализов ПЦР могут быть обширными, так как ПЦР диагностика инфекций может отхватить сразу несколько возбудителей заболеваний, что находятся в одном образце биоматериала. Обследование можно пройти в любое удобное время, что показывает анализ человек может узнать за короткий промежуток времени, так как результаты диагностики биоматериала готовы уже через 5 часов.

Все врачи сходятся во мнении, что анализ крови на ПЦР или другого материала никогда не дает ложные результаты, если правильно соблюдена методика проведения диагностики.

ПЦР положительный или ПЦР отрицательный может быть ложным, только при условиях, что лабораторные сотрудники не обладают высоким уровнем профессионализма.

Если изъятый биоматериал был загрязнен или его неправильно хранили, то расшифровка анализа ПЦР может иметь искаженные результаты.

Подготовка к проведению диагностики

Мазок на ПЦР у женщин из шейки матки берут, если требуется определить заболевания, передающиеся половым путем, к примеру, хламидии, уреаплазымы или герпес. Если ПЦР требуется провести на эти бактерии мужчине, то у него берется выделение из уретры — сок простаты, проще говоря.

Кровь методом ПЦР исследуют, если хотят определить гепатит, токсоплазмоз и ВИЧ. Делается анализ ПЦР на мононуклеоз и цитомегаловирус путем изъятия мазка из зева.

Полимеразную цепную реакцию на наличие легочных инфекций проводят с наличием такого биоматериала, как мокрота или плевральная жидкость.

ПЦР при беременности делают, если есть подозрение на наличие внутриутробных инфекций, а также болезней и патологий нервной системы плода.

В качестве биоматериала для исследования берут у беременной ткани плаценты. Если у человека поражение нервной системы, исследуют спинномозговую жидкость.

Для определения такой бактерии как хеликобактер пилори, используют биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки.

ПЦР-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованию

Анализ мочи ПЦР тоже используется нередко, но он менее предпочтителен нежели анализ крови. Он позволяет увидеть наличие патогенных микроорганизмов, что провоцируют инфекционные заболевания, но не может указать точное их количество и степень развития недуга.

ПЦР мочи используют, если нет возможности по каким-то причинам изъять кровь или сделать мазок. Также требуется отметить, что ПЦР мочи может проводиться для исследования инфекций у маленьких детей.

Анализ мочи позволяет также определить наличие инфекции и воспаления в мочевом пузыре, определить камни, песок, а также цистит и уретрит.

Многие даже не догадываются, что сделать анализ можно с помощью кала, конечно показывает этот тип исследования исключительно наличие паразитов в организме, а также наличие яиц, что остались после выведения взрослой колонии. Анализ кала покажет, сколько именно есть глистов в образце, это позволит определить степень поражения организма. А также врач сможет подобрать препарат, чувствительный к выявленному штамму паразита.

Как уже выше упоминалось, сдать анализ на ПЦР можно при наличии любого биоматериала. ПЦР анализ, что это такое, вам известно, требуется знать еще и подготовку к диагностике.

От того, что предстоит изъять, напрямую зависит подготовка, к примеру, сдавать мочу нужно после тщательной гигиены половых органов в утреннее время. Кровь сдают натощак, во время сдачи вернее, накануне, необходимо отказаться от употребления любых медикаментозных препаратов.

Если имеются хронические недуги, то список разрешенных препаратов для употребления решается индивидуально, лечащим доктором.

ПЦР-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованию

Анализ кала сдают в утреннее время после тщательной подготовки. Накануне сдачи, необходимо отказаться от тяжелой пищи и провести тщательную гигиену половых органов. Анализ кала будет недостоверным, если биоматериал был изъят с помощью клизмы, необходимо естественное нисхождение материала. Подготовка к сдаче слюны не требуется, достаточно оказаться от курения, употребления цитрусового сока.

Перед сдачей биоматериала на определение заболеваний, что передаются при сексе, пациентам требуется исключить половые контакт за два дня до ПЦР диагностики. Женщинам сдавать мазок из шейки матки запрещено во время критических дней через два дня после месячных, иначе ПЦР расшифровка будет иметь искаженные сведения.

Результаты скрининга

Детально объяснить, что такое анализ ПЦР говорит о состоянии того или иного пациента, может исключительно квалифицированный врач, самостоятельно понять данные, указанные в бланке, будет непросто.

Если вы попросите доктора-расшифруйте данные, то он в первую очередь скажет, положительный результат или негативный. Если анализ негативный — значит человек здоров, и никаких бактерий в исследуемом материале не обнаружено.

В случае с положительным результатом, указывается точный тип возбудителя и его количество, можно узнать также точный период, когда было заражение по наличию определенных иммуноглобулинов.

ПЦР-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованиюСуществует несколько классов иммуноглобулинов, что могут четко отобразить состояние пациента:

  1. IgG развиваются в крови поле 4 недель заражения и могут сохраняться в крови до нескольких лет. Они не всегда являются показателями бактерий, порой они ступают в качестве памяти организма о том, что когда-то он сталкивался с подобным типом возбудителя.
  2. IgM — появляются в самом начале после заражения. Как правило, они видны уже на 5 сутки, это первые защитники организма, что атакуют бактерию. Они исчезают из результата крови через две недели. Если они присутствуют в анализе крови, то можно предположить, что заражение произошло совсем недавно, примерно неделю назад.
  3. IgA сигнализируют об остром развитии бактериальной инфекции в организме или же об рецидивирующей стадии хронического недуга.

Есть ряд случаев, когда анализ показывает положительный результат, но человек и вовсе не чувствует себя плохо.

Это вовсе не говорит об ошибки проведения диагностики, скорей имеет место хроническая форма недуга, которая находится в спящем состоянии или же развитие болезни только начинается.

В это время нет достаточного количества бактерий, что могут спровоцировать симптоматику.

Теперь принцип анализа вам известен, и вы сможете обратиться за данной диагностикой, если появится наименьшее подозрение на инфекционное заболевание.

От того, насколько быстро вы пройдете диагностику, которая является практически безболезненной, напрямую зависит длительность дальнейшего лечения и его эффективность.

Чтобы постоянно поддерживать свое здоровье на хорошем уровне, рекомендовано раз в году проходить профилактическую ПЦР диагностику на наличие ЗПП, а также инфекций других органов. Лучше предупредить заболевание, чем потом бороться с его последствиями.

Источник: https://1diagnos.ru/laboratornye-issledovaniya/ptsr-analiz-chto-eto-takoe.html

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) диагностика: что это такое

В современном мире существует множество способов обнаружить возбудителей заболеваний на разных этапах развития заболевания.

Одним из таких методов является PCR (метод ПЦР или полимеразная цепная реакция), позволяющий выявить инфекцию на самом раннем этапе.

Буквально одна единица ДНК или РНК уже могут указать на наличие того или иного возбудителя в организме при должном уровне подготовки пациента и профессионализма лаборантов медицинского учреждения.

ПРЦ-исследование, что это такое?

Анализ на ПЦР заключается в копировании ДНК и РНК возбудителя в лабораторных условиях. Так как основным хранилищем генетической информации является ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), образованная 2 нитями, соединенными нуклеотидами, именно при множественном копировании (синтезе) этой кислоты можно установить наличие патогенного организма, если речь идет о бактерии.

ПЦР-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованию

Бактерии имеют свою собственную оболочку, защищающую их от внешней среды, которая нередко является агрессивной по отношению к последним. У вирусов же нет собственной оболочки (у некоторых представителей имеется нечто похожее на оболочку), а информацию в себе несет не ДНК, а РНК (рибонуклеиновые кислоты).

РНК устроены таким образом, что они встраиваются в цепи ДНК организма-переносчика и меняют их, позволяя проникать в клетки и жить за счет организма.

Грубо говоря, бактерии и вирусы оставляют «отпечатки» своими ДНК и РНК, которые и выявляет анализ ПЦР. Эти «отпечатки», как и отпечатки пальцев, являются уникальными для каждого возбудителя.

Поэтому ПЦР позволяет выявить заболевание на любых этапах, даже если развитие патогена происходит бессимптомно.

До широкого внедрения ПЦР в гинекологии и урологии на ИППП широко использовались методы:

  • микроскопия — окрашенные и неокрашенные препараты исследуются через микроскоп. Метод очень завязан на опытности лаборанта. Таким методом хорошо выявляются бактерии, имеющие большой размер (гарднереллы, кандиды, трихомонады, гонококки);
  • бактериология — метод заключается в выращивании возбудителей инфекции на питательном агаре, идентификации возбудителя и определения чувствительности его к антибиотикам. Долгое время считался «золотым стандартом». К минусам относят необходимость быстрой доставке материала в КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория), сроки выращивания и выяснения чувствительности к группам антибактериальных препаратов (как правило, 5-7 суток);
  • иммуноферментный анализ — Определение антител организма, возникающих в ответ на внедрение антигена возбудителем инфекции. Из плюсов стоит отметить возможность определения стадии заболевания (острая стадия сопровождается наличием IgG в сыворотке крови, хроническая – IgM.) К минусам относится невозможность определения у людей с ослабленным иммунитетом, а также специфичность ИФА. Другими словами, при наличии только результата иммуноферментного анализа, невозможно было выставить диагноз, а можно было только определить, что организм борется с какой-либо инфекцией.

Как происходит сдача анализов на ПЦР

ПЦР-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованию

В зависимости от материала, который забирается для проведения анализа ПЦР, существует несколько обязательных правил для пациента. Кровь сдается строго натощак утром. Мочу тоже стоит сдавать утром, первую порцию. Мокрота также сдается натощак, хотя это и необязательно. Мазки сдаются в любое время суток и имеют специфические требования. Мазок из ротоглотки также следует сдавать утром до приема пищи.

Забор материала производится сертифицированным специалистом стерильными одноразовыми инструментами. Берут анализ крови на ПЦР одноразовым стерильным шприцом, из вены забирают приблизительно 1-2 мл венозной крови для выявления таких инфекций как герпес или ВПЧ (вирус папилломы человека). Мочи достаточно 10 мл, мокроты – субстанции, размером со спичечную головку.

Для каждого вида анализа ПЦР существуют свои требования:

  • кровь, как говорилось выше, забирают из вены натощак;
  • мочу следует сдавать утром, первую порцию. Но, если забор является срочным, то достаточно сдать мочу по прошествии 2 часов после последнего мочеиспускания. Это позволит инфекции набрать необходимую критическую массу на 1 мл для более простого обнаружения патогена;
  • как берут соскоб из уретры. Первым делом обрабатывают раствором NaCl 0.9% наружное отверстие уретры. Затем, совершая циркулярные движения, зонд проводят на 2-4 см в уретру. Головку зонда, которая имеет щетинистое строение отсекают и кладут в пробирку со специальным раствором (своеобразный питательный агар для бактерий);
  • из влагалища производят мазок. Предварительно убирают секрет бартолиновых желез, затем из заднего нижнего свода влагалища специальной ватной палочкой происходит забор материала. При видимых патологических изменениях во влагалище мазок следует брать непосредственно на поврежденном участке;
  • как проводят соскоб из цервикального канала у женщин. Удалив слизь из наружных половых путей, зонд на 0,5 – 1,5 см вводят в шейку матки, совершают циркулярное движение и, не касаясь стенок влагалища, удаляют зонд из половых путей. Затем совершают действия, аналогичные соскобу из уретры;
  • из ротоглотки забор происходит натощак. Придерживая кончик языка, зондом производят мазок с задней стенки глотки, по миндалинам или по небным дужкам. Не соприкасаясь со слизистой ротовой полости и зубами, зонд выводится и отправляется на пцр-исследование;
  • из конъюнктивы, предварительно очистив физиологическим раствором гнойные выделения, производят соскоб слизистой нижнего века от латерального к медиальному краю. Веко при этом придерживается медицинским работником во избежание соприкосновения зонда со слизистой глаза и ресницами.

Подготовка к исследованию

ПЦР-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованию

Анализ на ПЦР является самым быстрым и достоверным способом на ранних этапах обнаружить инфекцию, но бывают и ложноположительные/ложноотрицательные результаты.

Для сохранения нервной системы как своей, так и сотрудников медицинского учреждения, следует правильно подготовиться к исследованию.

Подготовка к ПЦР у мужчин

Перед исследованием ПЦР мужчинам следует помнить, чего делать нельзя:

  • мочиться за 3 часа до исследования;
  • производить спринцевание и стерильную обработку члена;
  • мыть член мылом, содержащим антибиотик;
  • заниматься сексом за двое суток до ПЦР на ИППП;

Подготовка к ПЦР в гинекологии

Женщинам перед тем как сдать мазок на ПЦР запрещено:

  • при соскобе из уретры запрещено мочиться за 3 часа до исследования;
  • использовать вагинальные растворы с дезинфицирующими свойствами;
  • за двое суток до исследования применять суппозитории для влагалища;
  • использовать антибиотики местно, в том числе и мыло с антибиотиком;
  • занятия сексом за 48 часов до исследования;
  • применять антибиотик внутрь влагалища и уретры;
  • спринцеваться;
  • принимать антибиотики. После последнего приема антибактериального препарата должно пройти не менее 4 недель;
  • сдавать ПЦР во время менструации.

Общие сведения при исследовании мочи для мужчин и женщин

Следует сдать на анализ первую мочу утром, ее среднюю порцию. Другими словами начинать мочиться следует в унитаз. Затем остановить акт мочеиспускания, подставить под уретру баночку для сбора мочи, продолжить мочиться в течении 2-3 секунд, затем снова остановить мочеиспускание и, убрав контейнер, закончить акт мочеиспускания в унитаз.

Женщинам и мужчинам перед тем как сдать ПЦР следует хорошо вымыть наружные половые органы для исключения попадания в мочу смегмы (смесь секрета сальных желез крайней плоти) и выделений из влагалища.

Баночка для мочи должна быть стерильной. Попросите контейнер в клинике, где вы сдаете анализ, либо заранее приготовьте баночку с плотно закрывающейся крышкой и прокипятите их не менее 10 минут.

Непосредственно перед сдачей ПЦР запрещено:

  • мочиться (необходима самая первая порция мочи за день);
  • изменять количество выпитой за сутки до исследования жидкости. Это необходимо, чтобы поддерживать обычный водно-электролитный баланс организма, в котором себя комфортно чувствует потенциальный возбудитель инфекции;
  • использовать уросептики;
  • применять мыло, содержащее в себе антибиотик;
  • заниматься сексом за 12 часов до исследования;
  • при менструации желателен забор мочи уретральным катетером для исключения попадания крови в контейнер с мочой;

Если один из пунктов был нарушен:

Следует воздержаться от проведения диагностики инфекций методом ПЦР. Если же все-таки анализ был сдан, следует его повторить через двое суток. Если при использовании антисептиков и антибиотиков результат оказался «хорошим» – не стоит радоваться. Скорее всего, при наличии определенных жалоб, это ложноположительный результат.

Расшифровка результатов ПЦР

ПЦР-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованиюРасшифровка анализов ПЦР очень просто (см примерный бланк выше). Существует положительный и отрицательный результаты исследования. Положительный означает, что инфекция в организме есть, но это не должно наводить страх на пациента. Наоборот, это значит, что теперь можно начать лечение и вовремя остановить патоген. Отрицательный результат, соответственно, показывать отсутствие инфекции в организме.

Также не стоит забывать о ложноположительных/ложноотрицательных результатах. В медицине золотым стандартом является три одинаковых результата подряд в независимых клиниках. Стоит помнить, что в разных клиниках сама КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория) может быть одна.

То есть, здания и названия будут разные, но все анализы отправляются в одну лабораторию, связывающую эти клиники.

Поэтому, получив результат в одной клинике, для того, чтобы удостовериться в правильности данного результата, стоит обратиться еще в две клиники и узнать, не сдают ли они результаты в одну и ту же КДЛ.

Широкий спектр исследований

Метод ПЦР относится к группе обширных анализов. С помощью ПЦР анализа можно определить практически любое заболевание. К сожалению, это не самый дешевый метод исследования, поэтому его не назначают всем пациентам поголовно. Цены могут варьироваться в зависимости от клиники и количества исследований.

Существует полимеразная цепная реакция (анализы ПЦР) на 12 инфекций. Какие инфекции входят в ПЦР 12:

  • микоплазмы гениталиум (mycoplasma genitalium) и гоминис (hominis);
  • трихомонады (trichomonas);
  • хламидии (chlamydia trachomatis);
  • уреаплазмы (ureaplasma, включающая ureaplasma parvum (уреаплазмы парвум));
  • кандиды (candida);
  • гарднереллы (gardnerella vaginalis);
  • гонококк (neisseria gonorrhoeae);
  • антитела IgG, IgM;
  • герпеса двух типов.

Также есть упрощенная ПЦР 6 диагностика. Она исключает уреаплазму парвум, кандиды, гонококк, IgG, IgM, герпес обоих типов.

Пцр исследование на вич

ПЦР на ВИЧ следует выделить отдельным пунктом, так как тут существует специфический набор ограничений.

Во-первых, ПЦР на ВИЧ определяет не ДНК вируса иммунодефицита человека, а ДНК измененной вирусом клетки-лимфоцита. В нем будет храниться информация о вирусе и размножаться, создавая все больше пораженных лимфоцитов.

Сдавать анализ следует через 14 суток после известного контакта с ВИЧ-инфицированным человеком. Стоит помнить, что заразность этого вируса несколько преувеличена из-за тяжести нелеченного заболевания. Если произошел контакт через кровь, то тут шанс заразиться самый высокий, однако и он не превышает 85%. При остальных контактах вероятность заражения составляет от 1% до 10%.

При исследовании ПЦР на ВИЧ вероятность ложноположительного результата составляет около 2%, если не было нарушений среди медицинского персонала (правильно маркированная пробирка, не перепутали пробирки местами, не было загрязнения материала при вскрытии пробирки).

Длительность ПЦР может составлять от 4 часов до 7 суток, в зависимости от организованности медицинского учреждения, где происходит диагностика инфекций.

Плюсы и минусы ПЦР

При отражении плюсов ПЦР следует отметить:

  • чувствительность. Как говорилось выше, даже единичный агент, оставленный возбудителем, позволяет обнаружить инфекцию на ее ранней стадии или если она протекает скрытно;
  • широкий спектр. Например, ПЦР 6 позволяет 1 исследованием выявить целых 6 возбудителей;
  • точность. Ложные результаты при данном методе исследования имеют место быть, но их количество сведено к минимуму;
  • скорость. Как правило, пациент уже на следующий день может забрать готовый результат ПЦР исследования.

Минусы:

  • стоимость. ПЦР-исследование не включено в список исследований в системе ОМС. Дорогое высокоточное оборудование требует оплаты своей работы;
  • требования к соблюдению техники исследования и к профессионализму сотрудников;
  • требования к подготовке.

Источник: https://tvojajbolit.ru/issledovaniya/polimeraznaya-tsepnaya-reaktsiya-ptsr-diagnostika-chto-eto-takoe/

Как подготовиться к сдаче пцр

Материалом для исследования методом ПЦР могут быть различные биологические материалы: кровь, слизь, моча, мокрота, соскоб эпителиальных клеток, ткань плаценты, сок простаты, плевральная жидкость, околоплодные воды.

Для выявления инфекций, передающихся половым путем у женщин и мужчин берутся выделения из половых органов: соскоб или мазок из шейки матки, из уретры (мочеиспускательный канал), моча.

У ребенка материал для исследования берется из отверстия уретры.

Чтобы сделать исследование методом ПЦР на герпетические инфекции, цитомегаловирус, гепатиты В, С, токсоплазмоз, ВИЧ-инфекцию, у пациента берут кровь.

Для выявления инфекционного мононуклеоза, цитомегаловируса, герпетической инфекции также берется мазок из зева, При поражениях нервной системы берется спинномозговая жидкость, при диагностике внутриутробных инфекций – ткани плаценты, околоплодные воды, в пульмонологии материалом для ПЦР является плевральная жидкость, мокрота.

При обследовании на ЦМВИ дополнительно забирается моча.

Метод ПЦР позволяет получить точный и достоверный результат, однако для этого необходимо провести правильную подготовку к исследованию.

Пациент не должен иметь половых контактов за сутки до сдачи материала (при исследованиях соскоба из урогенетального тракта). Анализ сдавать натощак, поэтому до забора крови нельзя есть и пить. Моча сдается в чистый стерильный контейнер, для анализа нужна первая утренняя доза.

У женщин забор мазка не проводится в дни менструации, его берут перед месячными или через один-два дня после их окончания. Перед взятием мазка из урогенитального канала мужчинам нужно воздержаться от мочеиспускания на период 1,5-2 часа.

Перед взятием материала на гонорею нельзя выполнять туалет наружных половых органов, а также спринцевание. Кроме этого, за три-четыре часа до исследования нужно воздержаться от половых контактов, мочеиспускания.

Мочу нужно доставить в лабораторию в течение двух-трех часов.

Анализ ПЦР будет делаться не менее суток, обычно результат будет готов через 1,5-2 дня. Отрицательный результат будет указывать, что в исследуемом материале инфекция отсутствует. Положительный результат указывает на наличие инфекции в биологической пробе.

В некоторых случаях выявляется здоровое носительство: ПЦР оказывается положительной, а клинические симптомы болезни отсутствуют. Такое состояние не требует лечения, однако в этом случае необходимо регулярно наблюдаться у врача.

Следует знать, что передача инфекции здоровым людям от носителей возможна, также возможен и переход в хроническую форму заболевания с активацией процесса.

Самым информативным методом диагностики воспалительных и инфекционных гинекологических заболеваний у женщины является взятие мазка из половых путей. Исследование для женщины безопасно, безболезненно и не вызывает никаких неприятных ощущений.

ПЦР-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованию

Мазок берется с обязательным применением стерильных одноразовых зеркал и других медицинских инструментов, необходимых для проведения манипуляции. В диагностическом центре или клинико-диагностической лаборатории проводится развернутое цитологическое исследование и анализ микробной флоры влагалища и половых путей женщины. Для выявления воспалительного процесса (острого или хронического) дополнительно проводят микроскопическое исследование клеток и клеточных элементов. Лактобактерии или полезные микроорганизмы влагалища здоровой женщины защищают от болезнетворных и патогенных микроорганизмов, а также препятствуют развитию воспалительного процесса. Перед проведением процедуры забора мазка и получения достоверного анализа необходимо выполнить следующие условия: за 7 дней до анализа отменяются все антибактериальные и сульфаниламидные препараты; прекращается введение за 1-2 дня лечебных вагинальных свеч и проведение различных спринцеваний.

Как правило, врач акушер-гинеколог для проведения исследования берет из половых путей три мазка: из цервикального канала, со стенок влагалища, со слизистой уретры. Взятие каждого мазка проводится с помощью одноразовых стерильных шпателей.

Материал переносится шпателем на стерильное предметное стекло, помещается в контейнер и направляется для исследования в диагностический центр. Одновременно исследуемый материал помещается на питательную среду.

При размножении бактерий происходит образование специфических колоний, и одновременно определяется тест на чувствительность болезнетворных бактерий к антибактериальным препаратам.

По результатам лабораторного исследования врач гинеколог получает заключение о составе микрофлоры влагалища, о состоянии клеток эпителия, о количестве патогенных микроорганизмов. Повышение количества лейкоцитов говорит о наличии острого воспалительного процесса.

Источник: https://www.kakprosto.ru/kak-832351-kak-podgotovitsya-k-sdache-pcr

Пцр (полимеразная цепная реакция). как производится пцр диагностика, показания, как подготовиться к исследованию, результат пцр

Сайт предоставляет справочную информацию. Адекватная диагностика и лечение болезни возможны под наблюдением добросовестного врача. У любых препаратов есть противопоказания.

Необходима консультация специалиста, а также подробное изучение инструкции! Для адекватного и эффективного лечения многих инфекционных заболеваний необходимо своевременное установление точного диагноза. В решении этой задачи в наши дни привлекаются высокотехнологичные методы диагностики основанные на методах молекулярной биологии.

В настоящий момент  полимеразная цепная реакция (ПЦР) уже достаточно широко применяется в практической медицине как наиболее надежный инструмент лабораторной диагностики. Во-первых, данный метод используется для выявления возбудителей различных инфекционных заболеваний с высокой точностью. Во-вторых, для контроля эффективности проведенного лечения.

В различных руководствах, проспектах, статьях, а также объяснениях врачей-специалистов, мы часто сталкиваемся с употреблением непонятных терминов и слов. Действительно трудно рассказать о высокотехнологичных продуктах науки обыденными словами.

Каждый живой организм имеет свои уникальные гены. Гены располагаются в молекуле ДНК, которая собственно и является «визитной карточкой» каждого конкретного организма. ДНК (генетический материал) – это очень длинная молекула, которая состоит из «кирпичиков», называемых нуклеотидами. У каждого возбудителя инфекционных заболеваний они расположены строго специфично, то есть в определенной последовательности и комбинации. Когда необходимо понять имеется ли у человека тот или иной возбудитель, забирается биологический материал (кровь, моча, слюна, мазок), который содержит ДНК или фрагменты ДНК микроба. Но количество генетического материала возбудителя очень мало, и невозможно сказать какому именно микроорганизму он принадлежат. Для решения этой задачи и служит ПЦР. Суть полимеразной цепной реакции заключается в том, что берется малое количество материала для исследования, содержащего ДНК, а в процессе ПЦР происходит увеличение количества генетического материала, принадлежащего конкретному возбудителю и, таким образом, его можно идентифицировать. Идея метода ПЦР принадлежит американскому ученому K.Mullins, которую он предложил в 1983 году. Однако широкое клиническое применение получила лишь в средине 90-х годов XXвека. Разберемся с терминологией, что же это такое – ДНК и т.д. Каждая клетка любого живого существа (животного, растения, человека, бактерии, вируса) имеет хромосомы. Хромосомы – это хранители генетической информации, которые содержат всю последовательность генов каждого конкретного живого существа. Каждая хромосома состоит из двух нитей ДНК, закрученных в спираль друг относительно друга. ДНК – химически это дезоксирибонуклеиновая кислота, которая состоит из структурных компонентов – нуклеотидов. Нуклеотидов бывает 5 видов – тимин (Т), аденозин (А), гуанин (Г), цитозин (Ц) и урацил (У). Нуклеотиды располагаются друг за другом в строгой индивидуальной последовательности, образуя гены. Один ген может состоять из 20-200 таких нуклеотидов. Например, ген, кодирующий выработку инсулина, состоит из 60 пар нуклеотидов. Нуклеотиды имеют свойство комплементарности. Это означает что напротив аденина (А) в одной цепочке ДНК обязательно стоит тимин (Т) в другой цепочке, а напротив гуанина (Г) – цитозин (Ц). Схематически выглядит следующим образом:

  • Г — Ц Т — А
  • А — Т

Данное свойство комплементарности ключевое для проведения ПЦР.

Молекулы ДНК и РНК могут «размножаться» (данное свойство используется для проведения ПЦР). Происходит это следующим образом: две нити ДНК или РНК, отходят друг от друга в стороны, на каждую нить садится специальный фермент, который синтезирует новую цепочку.

Синтез идет по принципу комплементарности, то есть, если в исходной цепочке ДНК стоит нуклеотид А, то во вновь синтезированной будет стоять Т, если Г – то Ц и т.д. Этот специальный фермент-«строитель» для начала синтеза нуждается в «затравке» — последовательности из 5-15 нуклеотидов.

Данная «затравка» определена для каждого гена (гена хламидии, микоплазмы, вирусов) экспериментально.

Итак, каждый цикл ПЦР состоит из трех стадий. В первую стадию происходит так называемое раскручивание ДНК – то есть разделение связанных между собой двух цепей ДНК. Во вторую — происходит присоединение «затравки» к участку нити ДНК.

И, наконец, удлинение данных нитей ДНК, которое производится ферментом-«строителем».

В настоящее время весь этот сложный процесс протекает в одной пробирке и состоит из повторяющихся циклов размножения определяемой ДНК с целью получения большого количества копий, которые могут быть, затем выявлены обычными методами. То есть из одной нити ДНК мы получаем сотни или тысячи.

В качестве пробы служит различный биологический материал: кровь и ее компоненты, моча, слюна, отделяемое слизистых оболочек, спинномозговая жидкость, отделяемое раневых поверхностей, содержимое полостей тела. Все биопробы собираются одноразовыми инструментами, а набранный материал заключают в пластиковые стерильные пробирки или помещают на культуральные среды, с последующей транспортировкой в лабораторию. В забранные пробы добавляют необходимые реагенты и ставят в программируемый термостат – термоциклер (амплификатор). В амплификаторе 30-50 раз повторяется цикл ПЦР, состоящий из трех этапов (денатурация, отжиг и удлинение). Что это означает? Рассмотрим подробнее. I этап ПЦР — Подготовка генетического материала для копирования. Происходит при температуре 95° С, при этом нити ДНК разъединяются, и на них могут садиться «затравки». «Затравки» изготавливают промышленным способом различные научно-производственные объединения, а лаборатории покупают уже готовые. При этом «затравка» для выявления, например, хламидии, работает только для хламидии и т.д. Таким образом, если тестируется биоматериал на наличие хламидийной инфекции, то в реакционную смесь помещается «затравка» для хламидий; если тестирование биоматериала на вирус Эпштейн-Барра, то и «затравка» для вируса Эпштейн-Барра.

II этап – Объединение генетического материала возбудителя инфекции и «затравки».

Если имеется ДНК определяемого вируса или бактерии, «затравка» садится на эту ДНК. Этот процесс присоединения «затравки» и есть второй этап ПЦР. Данная стадия проходит при температуре 75°С.

III этап — Копирование генетического материала возбудителя инфекции.

Это процесс собственно удлинения или размножения генетического материала, который происходит при 72°С. К «затравкам» подходит фермент- «строитель» и синтезирует новую цепочку ДНК. С окончанием синтеза новой цепочки ДНК, заканчивается и цикл ПЦР. То есть за один цикл ПЦР происходит увеличение количества генетического материала в два раза. Например, в исходной пробе имелось 100 молекул ДНК какого-либо вируса, после первого цикла ПЦР в пробе будет уже 200 молекул ДНК тестируемого вируса. Один цикл длится 2-3 минуты.

Для образования достаточного количества генетического материала для идентификации, обычно производится 30-50 циклов ПЦР, что занимает 2-3 часа.

Собственно ПЦР на этом заканчивается и далее идет не менее значимый этап идентификации. Для идентификации используют метод электрофореза или меченые «затравки». При использовании электрофореза полученные нити ДНК разделяются по размерам, и наличие фрагментов ДНК разной длины свидетельствует о положительном результате анализа (то есть о наличии того или иного вируса, бактерии и т.д.). При использовании меченых «затравок», к конечному продукту реакции добавляют хромоген (краситель), вследствие чего ферментативная реакция сопровождается образованием окраски. Развитие окраски прямо свидетельствует, что вирус или другой выявляемый агент присутствуют в исходной пробе.

На сегодняшний день, используя меченые «затравки», а также соответствующее программное обеспечение, можно производить сразу и «чтение» результатов ПЦР. Это так называемаяreal-time ПЦР.

Одним из существенных преимуществ метода ПЦР является высокая чувствительность – от 95 до 100%. Однако, эти преимущества должны базироваться на непременном соблюдении следующих условий:

  1. корректный забор, транспортировка биологического материала;
  2. наличие стерильного, одноразового инструментария, специальных лабораторий и обученного персонала;
  3. строгое соблюдение методики и стерильности во время проведения анализа

Чувствительность различается для различных выявляемых микробов. Так, например, чувствительность метода ПЦР для выявления вируса гепатита С составляет 97-98%, чувствительность для выявления уреаплазмы – 99-100%. Возможности, заложенные в ПЦР-анализе, позволяют достичь непревзойденной аналитической специфичности. Это означает выявление именно того микроорганизма, который искали, а не похожего или близкородственного. Диагностическая чувствительность и специфичность метода ПЦР, зачастую превосходят таковые и для культурального метода, называемого «золотым стандартом» для выявления инфекционных заболеваний. Учитывая продолжительность выращивания культуры (от нескольких дней до нескольких недель), преимущество метода ПЦР становится очевидным.

ПЦР в диагностике инфекций

Преимущества метода ПЦР (чувствительность и специфичность) определяют широкий спектр применения в современной медицине. Основные области применения ПЦР-диагностики:

  1. диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний различной локализации
  2. контроль эффективности проведенной терапии
  3. уточнение вида возбудителя

ПЦР используется в акушерстве, гинекологии, неонатологии, педиатрии, урологии, венерологии, нефрологии, клинике инфекционных болезней, офтальмологии, неврологии, фтизиопульмонологии и др. Использование ПЦР-диагностики производится в совокупности с другими методами исследования (ИФА, ПИФ, РИФ и др.). Их сочетание и целесообразность определяет лечащий врач.

Вирусы:

  1. ретровирусы HIV-1 и HIV-2
  2. герпетиформные вирусы
  3. вирус простого герпеса 1 и 2 типов
  4. цитомегаловирус
  5. вирус Эпштейна-Барр
  6. варицелла – Зостер вирус
  7. герпес вирусы человека 6 и 7
  8. вирус гепатита С, В и А
  9. вирусы папилломы человека
  10. вирус краснухи
  11. аденовирусы
  12. риновирусы
  13. парвовирусы
  14. пикорновирусы

Бактерии:

  1. микобактерии
  2. хламидии
  3. микоплазмы
  4. сальмонелла
  5. легионеллы
  6. клостридии
  7. бледная трепонема
  8. различные патогенные виды кишечной палочки
  9. холерный вибрион
  10. риккетсии
  11. золотистый стафилококк
  12.  бактериальный возбудитель менингита
  13. хеликобактер пилори
  14. уреаплазма
  15. возбудитель гонореи
  16. дифтерийная палочка
  17. гемофильная палочка

В данном списке приведены наиболее распространенные инфекционные агенты, выявляемые методом ПЦР. На самом деле данный список гораздо шире, постоянно пополняется, так как синтезируются новые «затравки». Также следуют отметить, что список определяемых возбудителей определяется наличием «затравок» для идентификации в арсенале каждой конкретной лаборатории.

Источник: https://www.polismed.com/articles-pcr-polimeraznaja-cepnaja-reakcija-kak-proizvoditsja-pcr-diagnostika-pokazanija-kak-podgotovit-sja-k-issledovaniju-rezul-tat-pcr.html

Анализ ПЦР: суть метода и его преимущества

Анализ ПЦР – современный и высокоточный метод диагностики, позволяющий выявлять возбудителя инфекции независимо от стадии патологии. На сегодня этот способ обследования признан наиболее достоверным, так как он исключает получение ложных данных благодаря высокому уровню специфичности.

Анализ ПЦР – полимеразная цепная реакция, позволяющая многократно увеличить объем микробной среды и определить возбудителя. Явление ПЦР было открыто в 20 веке американским ученым Кэри Мюллисом, благодаря которому в разы сократилось время постановки точного диагноза, а следовательно, врачи стали быстрее назначать адекватные терапевтические мероприятия.

Суть анализа ПЦР заключается в многократном увеличении фрагментов ДНК возбудителя, полученного из биологических проб пациента (мочи, крови, слюны и других).

Эта методика позволяет увеличить в искусственной среде определенные участки генетического материала при помощи специальных ферментов, к тому же количество исследуемых фрагментов растет до такой степени, что можно их визуально исследовать.

Стоит отметить, что при анализе ПЦР копируются только определенные участки, играющие важную роль в диагностике. Если они присутствуют в организме пациента в ничтожно малом количестве, то этот анализ сможет их выявить.

Методика ПЦР активно используется в медицинской практике для изучения инфекционных и наследственных заболеваний, ведь помимо простого увеличения количества генетического материала (амплификации), он позволяет сращивать отдельные фрагменты ДНК и вводить мутации, осуществляя контроль за генами, которые вызывают опасения.

Что выявляет анализ ПЦР

Анализ ПЦР широко применяется в различных сферах медицины. Конечно, чаще всего он используется в гинекологии и урологии, но методика актуальна и для пульмонологии, фтизиатрии, гастроэнтерологии, онкологии и других областей.

Анализ ПЦР позволяет выявить вирусы на различных стадиях заболевания, также он способен выявить скрытые или «спящие» микроорганизмы, которые не вызывают появления клинических признаков:

  • Вирус папилломы человека разных типов (ВПЧ);
  • Хламидии;
  • Трихомонады;
  • Возбудителя гонореи;
  • Микоплазмы;
  • Уреаплазмы;
  • Гарднереллы;
  • Грибы кандида;
  • Микробактерии туберкулеза;
  • Вирусы гепатита А, В и С;
  • Хеликобактерии;
  • ВИЧ;
  • Вирусы герпеса;
  • Цитомегаловирусы (ЦМВ);
  • Вирусы Эпштейна-Барра.

Преимущества анализа ПЦР

  1. Высокая точность анализа: риск получения ложноотрицательных результатов минимален;
  2. Специфичность методики: анализ ПЦР позволяет выделить конкретный возбудитель инфекции, его вид и тип;
  3. Повышенная чувствительность: анализ ПЦР определяет даже несколько фрагментов ДНК микроорганизма;
  4. Возможность исследования разных биологических сред организма;
  5. Скорость получения результатов: их можно получить через 4-5 часов после процедуры;
  6. Возможность выявления нескольких микроорганизмов из одной пробы биологического материала.

Анализ ПЦР активно используется врачами разных специальностей, при этом отодвигаются на второй план другие методы диагностики. Стоит отметить, что эта процедура позволяет выявить носителей инфекции и латентные формы болезни, при которых нет клинических проявлений, но эти возбудители негативно отражаются на общем состоянии организма и его функциональности, а пациенты представляют опасность для окружающих.

Подготовка и проведение анализа ПЦР

Фрагменты ДНК микроорганизмов находятся в разных биологических средах пациента. Врачи сами определяют области взятия материалов для анализа ПЦР, которые зависят от типа заболевания и его локализации.

Если вы обратились к венерологу с целью выявления инфекций, передающихся половым путем (ИППП), то будут исследованы выделения из половых органов (мазок или соскоб с шейки матки, влагалища) и мочеиспускательного канала, а также кровь и моча.

Герпетические инфекции и мононуклеоз диагностируются на основании анализа мазков из полости рта пациента. ЦМВ подтверждается после обследования мочи, спинномозговой жидкости. В отделении пульмонологии для анализа ПЦР берут мокроту и содержимое плевральной полости. У беременных при подозрении на внутриутробные инфекции плода исследуют околоплодные воды и ткани плаценты.

Чтобы исключить вероятность ошибочных результатов и повысить точность анализа ПЦР, перед сдачей биологического материала следует придерживаться несложных рекомендаций:

  • Большая часть микробов вымывается вместе с мочой, поэтому перед взятием мазка из уретры не стоит мочиться;
  • В течение 3-5 суток следует воздержаться от половых отношений;
  • Анализ ПЦР не проводится сразу после прекращения менструальных выделений, следует подождать 5-7 дней;
  • За 4 часа до сдачи слюны необходимо отказаться от приема лекарственных препаратов и пищи, а перед процедурой рекомендуется прополоскать рот водой и провести легкий массаж в области щек;
  • Мочу следует собирать в утренние часы в стерильный контейнер, для исключения загрязнения материала перед его взятием следует подмыться, женщинам ввести стерильный тампон во влагалище, а мужчинам максимально оттянуть складку крайней плоти;
  • За сутки до сдачи материала надо воздержаться от приема алкоголя, острой пищи и горячих процедур (сауны, бани и т.п.);
  • За 2 недели до анализа ПЦР необходимо прекратить прием антибактериальных средств;
  • За неделю до обследования приостанавливают использование интимных гелей, мазей и вагинальных свечей.

Это довольно простые правила, но они помогут получить максимально достоверные результаты и снизить риск ошибок в диагностике.

Расшифровка анализа ПЦР

Результаты анализа ПЦР могут быть положительными или отрицательными. Отрицательный результат исследования свидетельствует об отсутствии инфекции в биологических материалах.

Положительный результат подтверждает наличие микроорганизмов, но для постановки точного диагноза необходимы сведения об их количестве.

Ведь в нашем организме присутствуют условно-патогенные микробы, которые становятся причинами заболеваний только в результате активного роста и размножения.

Основываясь на количественных данных анализа ПЦР, врач может выяснить стадию развития патологического процесса, его активность, подобрать специфическое лекарственное средство и его дозировку.

Анализ ПЦР во время беременности

Беременность – это особенный период в жизни каждой женщины. В это время многие ИППП или латентные инфекции могут быть крайне опасными для малыша и вызвать преждевременные роды, выкидыш, пороки и аномалии развития. Поэтому анализ ПЦР проводят всем беременным в плановом порядке преимущественно на ранних сроках (до 12 недель), но иногда назначают и во время 2 триместра.

Материал берут из канала шейки матки и уретры, процедура безболезненная и не представляет угрозы.

В большинстве случаев, анализ ПЦР проводят по поводу хламидий, уреаплазм, микоплазм, цитомегаловируса, герпеса и ВПЧ. Именно эти микроорганизмы представляют угрозу во время беременности.

Но иногда женщины проходят комплексный анализ ПЦР, который включается в себя исследование на большое количество микроорганизмов (12 и более).

Источник: http://www.probirka.org/diagnostika-besplodiya/9092-analiz-ptsr-sut-metoda-i-ego-preimuschestva.html

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Adblock
detector